雷公藤甲素对关节炎大鼠心功能的影响及其作用机制探讨

  目的  观察关节炎大鼠心功能的变化及雷公藤甲素的干预作用,探讨其可能的作用机制。  方法  将40只大鼠随机分为正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、来氟米特（LEF）组和雷公藤甲素（TP）组。除NC组外,其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备关节炎模型,制模第12天开始给药干预,TP组、LEF组大鼠分别灌胃其混悬液（TP 0.1 mg/mL,LEF 0.5 mg/mL）1 mL/100 g （体质量）,NC组、MC组大鼠相应时间灌胃等量的生理盐水,给药30 d。末次用药24 h后,采用左心室插管术检测大鼠心功能;应用酶联免疫吸附实验法测定血清超氧化物歧化酶(SOD）、丙二醛(MDA）、活性氧(ROS）、总抗氧化能力(T-AOC）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。采用荧光定量PCR法检测心组织Keap样蛋白1（Keap1）、肌腱膜纤维肉瘤(maf）、核因子-E2相关因子2(Nrf2）mRNA表达;采用Western blot法检测心组织Keap1、maf、Nrf2蛋白表达。  结果  ① 与NC组比较,MC组大鼠的心功能指标中心率（HR）、心脏指数（HI）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）升高,左心室压力上升和下降最大变化率（±dp/dtmax）降低(P均<0.01)。SOD、MDA、ROS、T-AOC、TNF-α升高,IL-10降低 (P均<0.01)。心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。② 与MC组比较,TP组大鼠HR、LVSP、HI、LVEDP降低,±dp/dtmax升高(P<0.01)。TNF-α、T-AOC、MDA、SOD、ROS下降,IL-10升高(P <0.05或 P <0.01)。TP组大鼠心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）。  结论  TP可改善关节炎大鼠心功能,其机制可能与提高心肌细胞抗氧化能力、减轻氧化应激损伤、抑制异常免疫炎症反应有关。     

新风胶囊治疗58例干燥综合征疗效观察

目的观察新风胶囊(Xinfeng Capsule,XFC)治疗干燥综合征(Sj9gren's syndrome,SS)临床疗效及其对凝血参数、外周血细胞因子、NF-кB信号通路蛋白的影响。方法将58例SS患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各29例。治疗组予XFC治疗(每日3次,每次3粒,3个月为1个疗程,连服1个疗程);对照组予硫酸羟氯喹(HCQ)治疗(每次0.2 g,每天2次,疗程同治疗组)。另选20名健康者作为健康组。采用全自动凝血仪测定两组治疗前后及健康组凝血参数(APTT、PT、FIB、TT、D-D);采用ELISA检测外周血细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)及NF-кB信号通路蛋白(P65、P50、IкBα)表达量;采用魏氏法测定ESR,全自动生化分析仪测定hs-CRP。结果 SS患者凝血参数异常44例,占受检总数的75.9%;与健康组比较,患者组D-D、FIB、IL-1β、TNF-α、P50、P65、IкBα及hs-CRP、ESR水平升高(P0.05,P0.01),IL-10水平降低(P0.01);相关性分析结果显示,凝血参数与细胞因子、NF-κB信号转导通路及炎症指标明显相关(P0.01,P0.05);药物干预后,治疗组和对照组凝血参数和实验室指标均有部分改善,两组有效率、总有效率分别为59%、86%和38%、72%,差异有统计学意义(P0.05);且治疗组在降低FIB、D-D,P50、P65,ESR、hsCRP水平,下调TNF-α、IL-1β,上调IL-10表达方面明显优于对照组(P0.05,P0.01)。结论 SS患者存在高凝状态,且与细胞因子、NF-κB信号通路的异常活化有关。XFC能有效改善SS患者高凝状态,其机制可能与XFC抑制细胞因子、NF-кB信号通路有关。     

基于miR-155/NF-κB信号通路探讨类风湿关节炎患者血瘀状态与肺功能的关系

目的基于miR-155/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨类风湿关节炎(RA)患者血瘀状态与肺功能的关系。方法选择RA患者60例,另设健康对照组(NC)20名。采用德国Jager Master Screen自动肺功能检测仪检测肺功能参数。ELISA检测两组血清中白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-4、IL-17、NF-κB激活子1(Act1)、p50、p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、血小板激活因子(PAF)、PAF-乙酰水解酶(PAF-AH)水平,全自动血细胞分析仪检测血小板(PLT),全自动凝血仪检测D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FBG)水平;Western blot法检测Act1、p65、p50、IκBα蛋白表达水平。一步法荧光定量PCR检测外周血miR-155。采用Spearman分析RA患者外周血中血瘀指标、细胞因子、NF-κB、miR-155及肺功能参数之间的相关性。结果与NC组比较,RA组患者IL-6、IL-17、miR-155、PAF水平明显升高,Act1、p50、p65、IκBα蛋白表达水平明显升高,而PAF-AH、IL-10、IL-4水平明显降低(P0.05,P0.01)。与轻度血瘀证组比较,重度血瘀证组的FEV1/FVC、FEF50、FEF75明显降低,miR-155明显升高,p65蛋白表达水平明显升高。且Spearman分析发现血瘀指标、细胞因子、NF-κB、miR-155及肺功能参数之间存在相关性。结论 RA患者体内的血瘀状态与肺功能异常密切相关,这可能与其体内miR-155的高表达、NF-κB的异常活化以及细胞因子网络的失衡有关。     

消瘀接骨散外敷联合中药内服对膝骨关节炎患者临床疗效的影响

目的观察消瘀接骨散外敷配合中药内服治疗膝骨关节炎患者(KOA)的临床疗效的影响。方法 60例均为2018年1月—2019年10月安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科诊断明确的KOA患者,采用随机数字表法分为观察组30例(消瘀接骨散外敷配合中药内服+氨基葡萄糖口服)、对照组30例(氨基葡萄糖口服)。治疗4周后观察2组治疗前后血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-4、IL-10、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、西安大略和麦克马斯特调查量表(WOMAC)评分、关节炎严重程度(Lequesne MG)评分、VAS评分、生活质量量表(SF-36)评分、焦虑自评量表(SAS)评分、抑郁自评量表(SDS)评分。结果与治疗前比较,两组ESR、CRP、TNF-α、IL-1β、MMP-9、WOMAC评分、Lequesne MG评分、VAS、SAS评分明显降低,IL-4、IL-10、一般健康状况(GH)、生理功能(PF)、躯体疼痛(BP)、社会功能(SF)的评分明显升高(P0.05,P0.01);与对照组治疗后比较,观察组ESR、CRP、TNF-α、IL-1β、MMP-9、WOMAC评分、Lequesne MG评分、VAS、SAS评分下降更明显,IL-4、IL-10、生理职能(RP)、精力(VT)升高更明显(P0.05,P0.01)。结论消瘀接骨散外敷配合中药内服能够改善KOA患者实验室指标,减轻临床症状,提高生活质量。     

基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征模型大鼠心功能的机制

目的基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征（Sjogren′s syndrome,SS）模型大鼠心功能变化的机制。方法将48只Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为4组：空白对照组（空白组）、模型对照组（模型组）、黄芪多糖组（中药组）和羟氯喹组（西药组）,每组12只,分别向每只大鼠（空白组除外）两后足跖部注射与弗氏完全佐剂充分乳化后的颌下腺蛋白混合抗原0.1 mL,诱导SS模型。致炎后第19天开始干预,空白组及模型组均给予等量生理盐水（1 mL/100 g）,其余组分别给予黄芪多糖（1 mg/100 g）、羟氯喹（0.031 25 g/kg）,各组每天干预1次,连续干预30天。给药结束后观察大鼠的体质量变化、饮水量变化、颌下腺指数、脾指数、腺体组织学变化;采用有创血流动力学监测SS模型大鼠心功能的变化;采用ELISA法检测血清中活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,TAC）、TNF-α、IL-35;HE染色观察心肌组织的病理学改变;免疫组化染色观察ROS、活性氮自由基（reactive nitrogen species, RNS）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）表达;实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR）检测Keap1、Nrf2、ARE mRNA蛋白的表达;Western blot方法测定大鼠心肌组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamic acid and a half long glycine synthetase,γ-GCS）、血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、HR、 心脏指数（HI）、左室收缩期压（LVSP）、左室舒张期压（LVEDP）、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、MafmRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达升高（P〈0.01）,体质量、左室内压上升下降最大速率（±dp/dtmax）、SOD、TAC、IL-35、GSH、TRX蛋白表达降低（P〈0. 01）。与模型组比较,两个给药组干预后大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、LVEDP、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、Maf mRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达均降低（P〈0. 05）,而大鼠的体质量、±dp/dtmax、SOD、TAC、 IL-35、GSH蛋白表达、TRX蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0. 01）;西药组HR升高（P〈0.05）;中药组HR、LVSP降低（P〈0.05,P〈0.01）。与西药组比较,中药组HR、LVEDP、±dp/dtmax、γ-GCS蛋白表达降低（P〈0.05,P〈0. 01）,SOD、TAC、GSH、TRX、HO-1蛋白表达升高（P〈0.01）。HI与ROS呈正相关（P〈0.05）;LVSP、LVEDP与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈正相关（P〈0.01）,与TAC呈负相关（P〈0.05,P〈0.01）;±dp/dtmax与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈负相关（P〈0.05）,与TNF-α呈正相关（P〈0.05）。结论干燥综合症大鼠存在心功能下降,黄芪多糖改善心功能的机制可能是与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路活化密切相关。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠肺功能、Th细胞漂移及调节性T细胞的影响

目的观察新风胶囊不同剂量组对佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能、Th1/Th2细胞、调节性T细胞(Treg)的影响。方法将8 4只大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型(M)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TGT)组和新风胶囊低剂量(XFC-L)组、新风胶囊中剂量(XFC-M)组、新风胶囊高剂量(XFC-H)组,每组12只,分别向除NC组外的其余动物右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 m L致炎,致炎后第19 d开始给药。NC组及M组给予生理盐水,其余5组分别给予MTX、TGT、XFC。观察各组大鼠各指标的变化。结果 (1)与NC组比较,M组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺系数(LI)、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1表达明显升高(P0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg、IL-10、Foxp3表达明显降低(P0.01)。(2)与M组比较,各治疗组大鼠体重、FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF、IL-10及Treg、Foxp3的表达升高;E、AI、LI、FEV1/FVC%及TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1表达降低(P0.05,P0.01)。(3)与XFC-M组比较,其他各治疗组LI、肺泡炎积分及TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1升高;FVC、FEF25、FEF50、FEF75及IL-10、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg、Foxp3降低(P0.05,P0.01)。结论 AA大鼠在关节局部肿胀同时肺功能降低;新风胶囊能明显改善AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数和提高肺功能,其机制是通过促进IL-10、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg及Foxp3的表达、抑制TNF-α、Th1/Th2细胞及TGF-β_1的表达,降低炎症反应和免疫复合物对组织器官的损伤,改善关节和肺部症状。